Объем пробы является третьим по значению параметром, влияющим на ширину хроматографических пиков. Первыми, без сомнения, являются удерживаемый объем и число теоретических тарелок. Проба влияет на ширину пика не только своей величиной, но и видом своего концентрационного профиля. Опыт показывает, что в зависимости от конструкции устройства ввода пробы, проба претерпевает изменения до того, как она достигнет сорбента. Изменения состоят в том, что концентрация вещества в разных местах будет неодинакова, т. е. концентрационный профиль может существенно отличаться от прямоугольной формы. Скорее всего, профиль может иметь вид кривой Гаусса.
Рассмотрим на примере этих 2-х случаев вклад пробы в ширину хроматографического пика. Для прямоугольного концентрационного профиля вклад объема пробы выражается следующей формулой: |
σ = σo [ 0,257 (Vin / σo)2 +1], |
(2) |
где
σ - ширина пика на расстоянии полувысоты от основания пика;
σo - ширина пика при исчезающе малом объеме пробы;
Vin - объем пробы.
Это формула верна при 0<= Vin/ σo <= 2.
Если концентрационный профиль пробы представляет собой кривую Гаусса, то ширина пика равна
где
σin - ширина кривой концентрационного профиля.
Сравнение этих 2-х формул показывает, что при небольших величинах объема пробы ход закономерности фактически идентичен. Можно сказать, что
Отсюда следует, что при небольших объемах пробы нет большой необходимости в выяснении вида концентрационного профиля.
|
