Влияние экзогенных трех- и шестиуглеродных углеводов на биосинтез аскорбиновой кислоты в проростках ячменя
Химизм биосинтеза аскорбиновой кислоты (АК) в растениях до сих пор не достаточно ясен. Известно, что новообразование АК стимулируют гексозы, из которых предпочтение отдается галактозе [1, с. 271]. Метаболизм гексоз в АК может идти или через образование промежуточных триоз, или без разрыва углеродного скелета исходной молекулы углевода. Во втором случае ряд исследователей (2) допускает возможность инверсии углеродной цепи, другие [3] отрицают ее наличие. Необходимость образования триоз из исходных гексоз при биосинтезе АК нами проверялась в опытах с использованием экзогенного диоксиацетона в качестве субстрата для АК. Действие диоксиацетона сравнивалось с С6-субстратами - глюкозой и галактозой.
Объект и методы исследования
В качестве объектов исследования использовались 6-дневные зеленые, этиолированные и альбиносные проростки ячменя ярового (Hordeum vulgare L.) сорта Роланд. Альбиносные проростки получали из обработанных 0,25% раствором стрептомицина семян. Проростки выращивали при естественном освещении и комнатной температуре. Содержание аскорбиновой кислоты и ее дериватов - дегидроаскорбиновой кислоты (ДАК) и дикетогулоновой (ДКГК) - определяли колориметрически [4, с. 17]. Диоксиацетон, используемый в опытах, был получен методом биотрансформации глицерина с помощью Gluconobacter oxydans [5]. Освещение проростков в опытах проводилось в установке “Флора” с люминесцентными лампами ЛДЦ-40. Интенсивность света равнялась 33 тыс. эрг см-2 с-1, экспозиция - 24 часа. Опыты выполнялись в двух биологических повторностях и воспроизводились 2-3 раза. В работе приводятся средние значения из всех опытов и средние ошибки измерений.
Результаты и обсуждение
С целью изучения возможности использования шестиуглеродных соединений (глюкозы, галактозы) в качестве субстрата в биосинтезе АК использовались листья ячменя с различной пигментацией: зеленые, этиолированные, альбиносные, с тем чтобы решить вопрос об источнике используемых углеводов (фотосинтетические или запасные) и определить зависимость биосинтеза АК из углеводов от энергетических процессов - фотосинтеза и дыхания.
Масштаб биосинтетического процесса, ведущего к накоплению АК, характеризует не только образование восстановленной формы АК, но и ее дериватов, так как наряду с новообразованием АК идет ее активное использование с образованием ДАК и ДКГК. Поэтому в опытах по изучению возможности использования С6-углеводов - глюкозы и галактозы в биосинтезе АК одновременно определялось содержание АК, ДАК и ДКГК.
Как видно из рисунка, при освещении листьев ячменя, находящегося на воде и 1% растворах глюкозы и галактозы, уровень восстановленной формы АК повышался по сравнению с исходным содержанием во всех вариантах, но превышение контрольного значения (листья на воде) отмечено только при использовании в качестве субстрата глюкозы.
Освещение зеленых листьев ячменя привело к снижению уровня дегидроаскорбиновой кислоты по сравнению с исходным содержанием только в контроле; в листьях, находящихся на растворах углеводов, содержание ДАК превзошло и контрольное и исходное содержание. Следовательно, дополнительное снабжение листьев шестиуглеродными углеводами активизировало использование восстановленной формы АК, причем в равной мере и в опыте с глюкозой, и с галактозой.
Дальнейшая метаболизация ДАК с образованием ДКГК активнее была в листьях, находящихся на 1% растворе глюкозы по сравнению с галактозой.
Таким образом, С6-углеводы (глюкоза и галактоза) стимулируют накопление АК в листьях ячменя на свету. Причем глюкоза активизирует образование и восстановленной и окисленной формы АК, галактоза - только дегидроформы.
В этиолированных листьях (рис. 2) свет активно стимулировал накопление АК и в листьях, находящихся на воде, и особенно в листьях, помещенных в 1% растворы глюкозы и галактозы. Однако стимуляция биосинтеза АК глюкозой была выше, чем галактозой.
Уровень окисленной формы АК, а также продукта ее необратимого окисления - ДКГК при освещении этиолированных листьев снизился по сравнению с исходным, что говорит о пониженном использовании АК в этиолянтах. Возможно, это и является одной из причин более активного накопления восстановленной формы АК в этиолированных проростках на свету по сравнению с зелеными.
Еще в большей степени, чем в этиолированных проростках, блокированы процессы, связанные с функционированием фотосинтетического аппарата, однако у альбиносов их реакция на освещение была ближе к зеленым проросткам, чем к этиолированным (рис. 3). Исходный уровень АК в зеленых проростках был выше, чем в альбиносных, но характер изменения содержания АК и в контрольных листьях (на воде), и в листьях, находящихся в растворах углеводов, был одинаковым: свет стимулировал повышение уровня АК во всех вариантах, но превышение контрольного значения было отмечено только на глюкозе. У альбиносных проростков, так же, как и у этиолированных и зеленых, содержание ДАК на свету повысилось по сравнению с контрольным значением в присутствии экзогенных углеводов, особенно галактозы. Содержание ДКГК при этом не превышало контрольный уровень.
